无创在体内检测:双光子显微镜可以用于局部微蚀镭射磨皮后的胶原重塑的检测。

近年来，已经发展了各种用于抗衰老整容手术的皮肤再生治疗方法，包括依托激光技术的镭射磨皮。其是利用高能脉冲激光照射皮肤，产生热震，刺激成纤维细胞产生新的胶原。其中规则排列的胶原与衰老相关，能够产生皱纹。为了避免较长伤口的愈合时间过长及相关的风险，现在发展了一种改进的方法：局部微蚀镭射磨皮法，其仅仅烧蚀光栅扫描点上的皮肤，而光所携带的能量仍能够刺激成纤维细胞产生新的胶原。

这种治疗的宏观效果可以用肉眼或是白光数码相机检测。而在微观尺度水平上，如果没有组织切片或相似的创伤技术，我们是很难检测0.2mm或更深处胶原的改变。然而现代成像技术却给我们提供了一个非创伤性的选择。来自意大利佛罗伦萨和罗马的科学家团队使用组合的TPF-SHG显微镜，用它来研究局部微蚀镭射磨皮的效果。

双光子荧光(TPF)显微术是一种能够对深层组织进行光学成像的高分辨率激光扫描成像技术。另外， SHG显微镜可以与TPF显微镜结合使用，并且用同一个激光源。可由二次谐波发生(SHG）显微镜提供形貌信息。

在他们的研究中，研究者在进行激光治疗前以及治疗后40天，对健康测试者的前臂进行活体双光子成像。（结果显示）激光处理后的40天里，新的胶原重新产生，真皮中无定型组分增加。由经验丰富的皮肤病专家肉眼观察获得的真皮SHG图像，证明了年长测试者的胶原更容易合成与重建，而年轻测试者的胶原的很难改变。根据真皮二次谐波自体荧光衰老指数(SAAID)及定量的光谱分析，可以确定的是治疗效果具有时间依赖性，而SAAID是一种公认的对由非线性显微镜方法进行皮肤老化评估的评分方法。另外，还使用了灰度共生矩阵(GLCM）的方法对SHG图像分析，GLCM是一种对皮肤胶原组织评分的通用方法。

与此同时，也证实了活体多光子显微镜对皮肤癌和别的皮肤病的诊断的可行性，该研究首次证明其作为基于激光无创治疗的技术为后续诊断提供了可能性。它也有望成为新的针对皮肤病治疗的胶原靶，并且为后续治疗提供了一种很好的手段。研究者确信，不久以后非线性激光扫描显微镜将会应用到皮肤病的临床治疗上。